优秀论文

       食品中27种农药多残留测定方法液相色谱—串联质谱法

                       于红卫  曲  青  于维森  郝  文

（青岛市疾病预防控制中心）

农药是一类特殊的化学品，它既能防治农林病虫害，也会对人畜产生危害。因此，农药的使用，一方面造福于人类，另一方面农药残留在环境中，造成对环境的污染。大量散失的农药挥发到空气中流入水体中，沉降聚集在土壤中，污染农畜渔果产品，并通过食物链的富集作用转移到人体，对人体产生危害。有机磷类农药，作为神经毒物，会引起神经功能紊乱、振颤、精神错乱、语言失常等表现。拟除虫菊酯类农药，一般毒性较大，有蓄集性，中毒表现症状为神经系统症状和皮肤刺激症状。六六六和滴滴涕等有机氯农药随食物途径进入人体后，主要蓄积于脂肪中，其次为肝、肾、脾、脑中；通过人乳传给胎儿引发下一代病变。目前我国农药多用、滥用现象较为严重，国内农副产品由于农残超标而影响出口的占很大比重。而我国制定的食品中农药残留的标准有30余个，标准检验方法中多数方法为气相色谱法，不同农药残留的分析，使用的色谱柱不同、检测器不同，给检验人员全面分析食品中各类农药残留带来很大的困难，还容易对检出农残造成假阳性。因此，我们在日常工作中要开发新的实验方法，一次尽可能地检测更多种农药。本法用乙腈匀浆提取，盐析离心后，取上清液，以Envi-Carb柱和Sep-Pak-NH2柱净化，以液相色谱-质谱检测，可一次检测有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯和除草剂等27种农药，且准确定性、定量。本方法选择性强，达到残留量检测中所要求的检测浓度水平。

1材料与方法

1.1仪器  液相色谱-质谱联用仪 配有电喷雾离子源（ESI）（Agilent 1100 series LC/MSD trap）；电动振荡器；粮食粉碎机；组织捣碎机；旋转蒸发仪；移液器，1ml；具塞三角瓶，250 ml；分液漏斗，250ml；筒形漏斗；鸡心瓶，200ml；分析天平，感量0.1mg和0.01g。层析柱。

1.2试剂  乙腈：色谱纯；甲醇：色谱纯;二氯甲烷：色谱纯；氯化钠：分析纯；无水硫酸钠：分析纯，用前在650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。甲苯：优级纯；正己烷：色谱纯。Envi-Carb柱：6ml，0.5g；Sep-Pak-NH2柱：3ml，0.5g。

27种农药（0.025g-0.25g，购自Germany）：以甲醇溶解后配制成混合标准储备液，用样品空白溶液配置成不同浓度的基质混合标准工作溶液。

1.3样品的提取与净化

1.3.1试样制备

 样品取可食部分切碎，混匀，密封，作为试样。

1.3.2提取  

称取20g试样（精确至0.01g）于80ml离心管中，加入40ml乙腈，用高速组织捣碎机在15000r/min，匀浆提取1min，加入5g氯化钠，再匀浆提取1min，将离心管放入离心机，在3000 r/min 离心5min，取上清液20ml（相当于10g试样量），待净化。

1.3.3净化

1.3.3.1将Envi-18柱放入固定架上，加样前先用10ml乙腈预洗柱，下接鸡心瓶，

将上述20ml提取液在40水浴中旋转浓缩至1ml，备用。

在Envi-Carb柱中加入约2cm高无水硫酸钠，将该柱连接在Sep-Pak氨丙基柱柱顶部，并将串联柱放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4ml乙腈+甲苯（3+1）预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品提取液转移至净化柱上，再每次用2ml乙腈+甲苯（3+1）3次洗涤样液瓶，并将洗液移入柱中。在串联柱上加上50ml贮液器，用25ml乙腈+甲苯（3+1）洗脱农药，合并于鸡心瓶中，并在40℃水浴中旋转浓缩至约0.5ml。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，并迅速用乙腈+水（3+2）定容1ml，用于液相色谱-串联质谱测定。

1.4分析条件

扫描范围：50-600m/z 电喷雾 负离子模式

干燥气：氮气15L/min 350℃

雾化气：氮气 40Psi

碰撞电压：0.95V

色谱柱柱长：安捷伦C18  2.1×150 mm 内径：3.5μm  

PN：993967-906   进样10 μl   流速：0.2ml 柱温40℃

2 结果与讨论

采用本实验条件，各类农药在32min内流出，缩短了分析时间，适合大批样品的分析。采用全扫描监测离子方式，提高了灵敏度，同时达到27种农药完全检出，每种化合物选择2-3个二级特征离子，根据这2-3个特征离子，结合保留时间，可对样品中存在的农药进行定性，特别对于在复杂基质中与农药化合物保留时间一致而不是农药的化合物的假阳性结果可进行排除。定量则选择一个干扰小、特征性高的二级离子，采用标准曲线外标法通过工作站进行定量。

2.1定性测定：样品溶液按照液相色谱——串联质谱测定条件分别进行测定，进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的2-3个二级特征离子均出现，且与标准样品的2-3个特征离子相一致，则可判断样品中存在这种农药。

2.2定量测定：本方法中液相色谱-串联质谱采用外标校准曲线法定量测定。为减少基质对定量的测定的影响，需用空白液来配制所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质标准工作溶液分别进样来绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药的响应值均在仪器的线性范围内。

（参考文献、图、表略）