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快速LAMP法检测海产品中副溶血弧菌的方法研究

卢京光  裴  琳  李欣荣  楚  敏  赵鲁青

（青岛市药品检验所）

摘  要： 副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus, VP)是一种食源性病原菌，主要存在于近海的海水、海水沉积物和鱼类、贝类等海产品中, 可引起食物中毒、反应性关节炎和心脏疾病等，发病呈世界性分布, 尤其在沿海地区发病较高。目前，海产品中副溶血弧菌的快速检测方法主要有荧光定量PCR法、显色培养基法（包括试纸片法）、环介导等温扩增技术（Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP）法等。LAMP法用于副溶血弧菌的快速检测在国内起步较晚，目前该方法应用于海产品中副溶血弧菌的快速检测尚未见报道。本文使用LAMP法对108批海产品进行副溶血弧菌检测，同时用国标法测定，对结果进行统计比较分析。选取副溶血弧菌阳性对照菌和阴性对照菌共13株进行方法的特异性、灵敏度试验，并确定即符合快检要求又有较高检出灵敏度的最短培养时间。选取108批海产品，分别用快速LAMP法和国标方法进行测定，对结果进行统计比较分析。结果表明，快速LAMP法检测副溶血弧菌专属性强，不受其他细菌的干扰；灵敏度高，当菌液浓度为10cfu/ml时可直接检出，含菌量＜1cfu/ml时，增菌培养4小时后即可检出。对108批海产品分别用LAMP法测定和国标方法进行测定，样品增菌4小时LAMP法的检出率高于国标法，阳性检出率LAMP法为59.3%，国标法为54.6%，对两组数据进行统计分析，两种方法无显著性差异。LAMP法检测副溶血弧菌快速、准确、操作简便、检测成本低，通过加入核酸染料可直接用目测比色判断结果；检测时间短，增菌4h进行测定，检测完成仅需要5个多小时，即符合快速检测的要求，又能确保方法的灵敏度，大大提高了检测效率，有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。

（参考文献、图、表略）