优秀论文

海地瓜脑苷脂的气相色谱-质谱法联用分析

徐  杰  冯婷玉  丛培旭  李兆杰  薛长湖

(中国海洋大学食品科学与工程学院)

海参自古以来就是保健食品和营养食品^[1]，海参中含有多种重要生物学活性物质，这些生物活性物质具有抗肿瘤、抗凝血、镇痛、提高免疫力、抗真菌、降血脂、防治类风湿关节炎、关节强硬性脊椎炎和骨性关节炎等作用^[2]。海地瓜（Acaudina molpadioides）盛产于亚热带沙质海区，我国山东到海南岛的海域均有分布，是一种资源丰富的低值海参。本文以从海地瓜提取纯化的脑苷脂类物质为对象，使用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对其脑苷脂组成进行了初步分析。

1 实验方法

脑苷脂样品2mg，加入10%HCl-甲醇溶液1mL，70℃反应18小时。冷至室温，再用正己烷萃取三遍，正己烷层（脂肪酸甲酯，fatty acid methyl ester, FAM）减压浓缩至干后加入正己烷500μL，过滤后待采用GC-MS法分析FAM组成。甲醇层使用碳酸银中和至pH中性，过滤后减压浓缩至干，向其中加入200μL三甲基碘硅烷和200μL吡啶，70℃硅烷化衍生反应15分钟。反应完成后，冷至室温，过滤后待采用GC-MS法分析三甲基硅醚长链碱（TMS Ethers of long chain base，TMS Ethers of LCB）和甲基糖（methyl glycoside）组成。脂肪酸的GC-MS分析条件：INNOWax (0.32mm×30m×0.25μm，J&W)柱，从150℃开始，以4℃·min^-1程序升温至280℃，持续2min。长链碱和糖基的GC-MS分析条件：HP-5 MS (0.32mm×30m×0.25μm，J&W)柱；从180℃开始，以4℃·min^-1程序升温至250℃，持续10min。扫描范围40-550amu。分别提取m/z=132和m/z=217的特征离子进行LCB和甲基糖组成的定性分析。

2 实验结果

分别分析测定了AMC-1、AMC-2、AMC-3三种海地瓜脑苷脂的脂肪酸、长链碱和糖基组成。主要为饱和的、单不饱和的和含羟基的脂肪酸，长链碱有二羟基和三羟基两种结构，糖基主要为葡萄糖。其中，脂肪酸的组成及比例AMC-1为C18:0（14.99%），C22:0（34.83%），C23:0（13.71%），C24:1（17.51%），2-OH,C24:1（18.96%）；AMC-2为2-OH,C18:0（43.32%），2-OH,C22:1（20.79%），2-OH,C23:1（18.53%），2-OH,C24:1（17.36%）；AMC-3为2-OH,C22:0（47.22%），2-OH,C23:0（36.24%），2-OH,C24:1（16.54%）。长链碱AMC-1和AMC-2为d17:1；AMC-3为t17:0。三种脑苷脂均属于葡萄糖脑苷脂，其中AMC-1与AMC-2的长链碱组成相同，仅脂肪酸构成不同，且AMC-2的脂肪酸主要由含羟基的脂肪酸构成，致使AMC-2的极性较AMC-1大。而AMC-3的长链碱较AMC-1与AMC-2多一个羟基结构，脂肪酸也主要由含羟基的长碳链脂肪酸组成，使其极性最大。三种脑苷脂组分在结构上均存在一定异同，不论是脂肪酸结构差异还是长链碱的结构差异最终致使三者在TLC中呈现明显的独立斑点。

3 结论

通过GC-MS法分析海地瓜脑苷脂，操作简便，稳定性和重现性良好，该方法满足对脑苷脂类物质进行定性分析的要求，可对脑苷脂的结构进行初步分析，也为以后进行脑苷脂类物质的生物活性测定以及研究其在医药科学中的应用提供参考。

（参考文献、图、表略）