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超高效液相色谱法（UPLC）快速测定辣椒素类物质

赵春华¹   侯倩慧²

（¹ 青岛华测检测技术有限公司；²青岛普仁仪器有限公司）

   本方法采用超高效液相色谱法，前处理条件简单、稳定易操作。3种主要辣味成分3分钟内出峰良好，实现对辣椒及辣椒制品的辣味水平的快速、准确测量评价。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 超高效液相色谱仪(ACQUITY ^TM Utra Performance LC),二极管阵列检测器，辣椒素 ( 纯度98%，国家标准物质中心)，20±4℃;二氢辣椒素(98%国家标准物质中心)，20±4℃℃储存;甲醇(色谱纯，Teda公司，美国)，酸性氧化铝（100—200目），上海晶纯试剂有限公司，其他试剂为分析纯。

1.2 标准溶液配制

准确称取辣椒素和二氢辣椒素标准品0.010g(折算为纯品)，用甲醇溶解准确定容至10mL,配制成 l mg/mL 的标准贮备液。用甲醇逐渐稀释系列标准溶液。

1.3 样品前处理

干辣椒样品用电动粉碎机粉碎，均过0.391mm筛，称取样品1.0g（精确到0.001g）于50mL离心管内，加入1.0g酸性氧化铝粉，准确加入四氢呋喃：甲醇（1：1）溶液10mL，涡旋，震荡1min。放在超声波内超声提取30min。取出冷却至室温，高速离心3min。取出上清液100μL用甲醇稀释10倍,混匀，过0.22μm滤膜备用。

1.4 色谱条件

色谱柱：BEH C18 1.7μm （2.1rnm ×50mm )，流动相：A:水 B:乙腈 柱温：40℃  流速：0.3mL/min ；（梯度程序略）

1.5 定量测定

辣椒素同系物总量(以SHU计)=

ρ_NDHC 一 去甲二氢辣椒素浓度，mg/L；ρ_C 一 辣椒素质量浓度，mg/L；ρ_DHC 一 二氢辣椒素质量浓；mg/L；V一定容体积，m一取样量，g； 9300 ，16100 为SHU换算系数。 

2  结果与讨论

2.1 流动相的确定及去甲二氢辣椒素色谱峰的确认

通过对常用洗脱溶剂、PH值等条件的优化，确定了最佳洗脱条件，见1.4 色谱条件。从C的主峰分出一明显的小峰(1.415min)，且该峰与C、DHC 的峰面积比为1:3:6，基本符合辣椒中辣椒素同系物各组分含量的比例。 该处的光谱图和1.587min（C）及2.197mun（DHC）处的光谱图完全一样。由此可断定该峰为NDHC，理论上可以用辣椒素的标准曲线定量降二氢辣椒素。

2.2 检测波长的确定

从图2标准的光谱图可以看出C和DHC 的紫外全波长扫描图完全一致。在230 nm和280nm 出现两个吸收峰。但在230nm范围下有紫外吸收的物质多，就越容易产生干扰。在280nm仪器的灵敏度已经满足测试要求，故还是采用280nm来进行定量。

2.3 不同提取剂的提取效果的比较

分别采用乙睛、饱和乙睛、四氢呋喃：甲醇（1：1）、甲醇、50％的甲醇水超声提取，试验发现：四氢呋喃：甲醇（1：1）的提取效果最好。

2.4 不同净化效果的比较

考虑使用石墨化碳和酸性氧化铝净化提取物里面的色素和油脂。净化后和净化前样品图叠加见图4。从图上可以看出，酸性氧化铝粉净化效果明显。石墨化碳虽除掉很多色素，但其前面的色谱杂质峰并没有很多变化，净化效果不理想。

2.5 检出限和定量限

以3倍信噪比(S/N)为检出限(LOD)，10倍信噪比为定量限(LOQ)。辣椒素、二氢辣椒素的LOD为0.05 mg/mL，LOQ为0.25mg/mL。

2.6 线性关系

以6个浓度水平绘制标准曲线，C标准曲线回归方程Y=7.69e+003X+1.40e+004,R=0.9996; DHC标准曲线回归方程Y=7.01e+003X+1.35e+004,R=0.9997。结果表明C和DHC 在1.0一100.0mL/L范围内线性良好。

2.7 回收试验

称取已知量的供试品1.0g，共9份，每3份为一组，分别加入低、高浓度水平的标准贮备液。按1.3 样品前处理方法进行处理，分别进样，由回归方程计算回收率，结果见表3（略），C、DHC 回收率分别为96.6%、95.0%

2.8 精密度试验

取 10.0 L mg/L标准溶液和样品制备溶液，按上述色谱条件。分别连续进样5次，进行精密度实验。结果标准溶液和样品溶液的RSD分别为0.8%，1.2% (n=5)。

（参考文献、图、表略）