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HPLC-MS/DPPH-DAD在线筛选、鉴别茶叶中抗氧化活性成分

王小如^1,2 陈军辉¹ 王 虹¹ 程红艳¹ 赵恒强¹ 王磊磊¹ 张道来¹

（¹国家海洋局第一海洋研究所；²厦门大学化学化工学院）

在从植物中寻找新的天然抗氧化剂时，人们普遍采用抗氧化活性测定指导下的分离方法，这项工作步骤烦琐、劳动量很大，常导致活性测定结果不准确，特别是对那些易被氧化的最有潜力的抗氧化剂。因此，迫切需要开发一种从复杂的天然产物提取物中快速筛选潜在抗氧化剂的方法。

本研究将基于在线高效液相色谱-二苯基三硝基苯肼（HPLC-DPPH^•） 快速筛选自由基清除剂的方法与电喷雾飞行时间质谱（ESI-TOF/MS）结合，发展一种茶叶粗提物中抗氧化活性成分在线筛选、鉴别的技术方法（也适用于其它天然产物提取物）。该方法是在HPLC色谱柱分离后进行分流（两路），一路进入ESI-TOF/MS用于各化合物的快速鉴别，另外一路流出液与稳定的自由基DPPH^• 混合，色谱柱洗脱液中包含的抗氧化剂对DPPH^• 发生给质子作用，使DPPH^• 在517nm 的特征吸收消失，在色谱图中形成负吸收峰，从而实现了在线检测自由基清除剂的作用。该方法用于茶水中抗氧化成分的快速筛选、鉴别，筛选出11个具有明显DPPH^•自由基清除作用的化合物，通过ESI-TOF/MS在线分析获得的质谱信息，结合相关文献和数据库，实现了各化合物的快速鉴别。

本研究所发展的在线快速筛选、鉴别茶叶中抗氧化活性成分的方法，不仅可用于茶叶中抗氧化成分的快速筛选、鉴别，还可做为陆源中草药及海洋药物中抗氧化活性成分快速筛选、鉴别的有效方法，该方法的适用范围广，重复性、稳定性好，突破了传统方法离线筛选、离线鉴定的模式，特别适合天然产物复杂体系中抗氧化活性成分的快速筛选、鉴别，大大提高了复杂天然产物中抗氧化活性成分的筛选效率，可大大节省人力物力的消耗。

（参考文献及图、表略）