优秀论文

HPLC-ESI-MS鉴定罗氏海盘车中的多种化合物

及相关指纹图谱研究

陈军辉¹ 张道来¹ 王 虹¹ 赵恒强¹ 程红艳¹ 臧家业¹ 王小如^1,2*

（¹国家海洋局第一海洋研究所；²厦门大学化学化工学院）

罗氏海盘车(Asterias rollestoni Bell.)是一种海星纲棘皮动物，广泛分布于我国渤海、黄海地区，作为一种海洋中药已有悠久的药用历史，具有平肝镇惊、制酸和胃、清热解毒等功效。目前，关于海盘车的文献报道主要集中在采用传统方法对海盘车中化学成分的分离鉴定及药理活性试验研究上，而应用液相色谱-质谱联用技术进行海盘车中化合物快速鉴别的研究尚未见报道。本文首次采用HPLC-MS联用技术对罗氏海盘车提取物中的化学成分进行快速分析，并结合文献，对罗氏海盘车中多种活性物质进行了鉴别。另外，在此基础上，建立了罗氏海盘车药材的HPLC指纹图谱。

对不同提取溶剂（水、甲醇、乙醇及三者混合溶剂）及不同比例的甲醇水溶液的提取效果进行比较，结果表明，以20%甲醇水溶液作为罗氏海盘车指纹图谱样品提取溶剂时，所得到的指纹图谱即有明显的指纹特征。本文同时对水浴回流提取法（90℃，1 h），超声波提取(0.5 h)和冷浸提取三种方法的提取效果进行比较，发现超声波提取法方便、快捷、提取效率高、便于操作、提取过程重现性好，因而选用超声波提取法进行提取。在比较了多种C₈ 和C₁₈色谱柱的分离效果的基础上，本研究选用两根不同性质的C₁₈色谱柱（Zorbax Bonus-RP 和Diamonsil色谱柱）串联进行分离。采用0.2% 的冰醋酸和甲醇做流动相，在260 nm 条件下检测到的色谱指纹图谱信息量大，特征性强，具有较好的代表性。综上所述，本文发展的HPLC方法精密度、重复性、稳定性良好，能满足建立罗氏海盘车HPLC指纹图谱及提取物中多种化合物的快速高效分离的要求。

对样品溶液，进行色谱-质谱联用分析，参考相关文献及中国科学院上海有机化学研究所中药与有效成分数据库，结合DAD光谱图鉴定出提取物中含有亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、胸腺嘧啶、肌苷、尿苷、色氨酸、次黄嘌呤、别呤醇、苯丙氨酸及肌苷的异构体C₁₀H₁₂N₄O₅共11种化合物。选10 批不同的罗氏海盘车样品，建立罗氏海盘车样品的HPLC 指纹图谱， 得到15个色谱峰作为罗氏海盘车指纹图谱的指纹特征，用于鉴别真伪、评价罗氏海盘车质量。应用 “中药指纹图谱相似度计算软件”，对10 批不同供试样品指纹图谱的相似性进行计算，发现不同批次的罗氏海盘车样品的质量参差不齐。由此可见，在多种化合物鉴定的基础上建立的罗氏海盘车药材指纹图谱特征，结合相似度分析，可以区分质量有差异的罗氏海盘车样品，对罗氏海盘车药材质量评价有重要意义。

（参考文献及图、表略）