优秀论文

 

降糖类中药制剂及保健品中违禁添加8种化学药

超高效液相-串联四级杆质谱测定法

杨 钊  陈安珍吴爱英 李欣荣

 ( 青岛市药品检验所)

本文建立的超高效液相-质谱联用定性和定量检测降糖类中药制剂及保健品中违禁添加8种化学药的方法，克服了已有方法的缺点，是一种准确、快速、选择性强的检测方法。

1 实验材料（略）

2 方法与结果

2.1 色谱条件  Waters ACQUITY UPLC^TM BEH C₁₈（2.1´50 mm，1.7 mm）色谱柱；流动相：甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1）；流速：0.4 mL•min^-1；柱温：35 ℃；进样量：10 mL。

2.2 质谱检测条件  扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应检测（MRM）；毛细管电压：3.0 kV；源温度：110 ℃；去溶剂气温度：350 ℃；去溶剂气流量：550 L•h^-1；锥孔气流量：50 L•h^-1。

2.3 对照品溶液的制备  取盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列奇特、格列吡嗪、盐酸吡格列酮、格列苯脲、格列美脲和格列喹酮8种对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含1 mg的对照品液并保存于冰箱中。分别量取上述8种对照品溶液适量，用甲醇稀释得每1 mL含100 μg的混合对照品储备液并保存于冰箱中。将上述混合对照品储备液用甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1）稀释得每1 mL含1 μg的混合对照品使用液。

2.4 标准曲线的制备  将混合对照品使用液用甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1）逐级稀释，得标准系列，浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 mg•L^-1。每个浓度平行3份，在拟定的UPLC-MS/MS条件下测定，用以计算标准曲线。盐酸二甲双胍等8种对照品在0.5~200.0 mg•L^-1线性关系良好。

2.5 检出限和定量限的测定

根据盐酸二甲双胍等8种对照品在信噪比为3：1时的溶液浓度，计算得出测定方法的检出限（DOL）；根据10：1时的浓度，计算得出测定方法的定量限（QOL）。

2.6 精密度试验  取50.0 mg•L^-1混合对照品液在拟定的UPLC-MS/MS条件下连续测定8次，由盐酸二甲双胍等8化学药定量离子的峰面积计算精密度，RSD在0.6~1.6 %之间（n=8），表明精密度良好。

2.7  供试品溶液的制备  取片剂或丸剂，细致研磨粉碎，取约0.3 g，精密称定；或取胶囊剂，取出内容物连同胶囊壳细致研磨粉碎，取约0.3 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入约40 mL甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1）超声处理（功率250W，频率25kHz）10min，放冷后定容至刻度；若供试品为液体，量取10 mL置50 mL容量瓶中，加入约30 mL甲醇超声处理（功率250W，频率25kHz）10min，放冷后用甲醇定容至刻度；将上述溶液高速离心（不小于10 000 rpm），取上清液用甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1）稀释100倍，0.22 mm微孔滤膜滤过，取续滤液，即为供试品溶液。

2.8  回收率试验  选择不含盐酸二甲双胍等8种化学药的试验样品，细致研磨粉碎，取约0.3 g，精密称定，共取九份，分置50 mL容量瓶中，分别加入约40 mL甲醇：0.01 mol•L^-1醋酸铵溶液（1：1），每三份一组，分别精密加入混合对照品贮备液5.0，1.0和0.25 mL，按2.7方法提取，终浓度分别为100.0、20.0和5.0 mg•L^-1。在拟定的UPLC-MS/MS条件下测定并计算回收率。

2.9  重复性试验  取其它降糖类产品的10号样品约0.3 g，精密称定，按2.7方法提取，平行六份。在拟定的UPLC-MS/MS条件下测定。结果盐酸二甲双胍的平均添加量为1.03 %，RSD 0.7%（n=6）；盐酸吡格列酮的平均添加量为0.15 %，RSD 0.9 %（n=6）；格列苯脲的平均添加量为0.23 %，RSD 2.5 %（n=6）。证明此方法重复性良好。

2.10 样品的测定  40批样品分别按2.7方法提取，各平行两份，在拟定的UPLC-MS/MS条件下测定。降糖类中成药20批，发现有一批违法添加了盐酸二甲双胍和格列苯脲，浓度为2.93%和0.34%。降糖类中药医院制剂10批，均未发现违法添加上述8种化学药。

3 讨论

检验的20批降糖类中成药，只有一批发现违法添加了盐酸二甲双胍和格列苯脲，经落实为其他厂家生产的仿冒产品。降糖类中药医院制剂10批，均未发现违法添加上述8种化学药。因此正规药厂和医院生产的降糖类中成药及医院制剂基本未出现违法添加的情况。

而其它10批降糖类产品的违法添加情况非常严重。说明保健品、食品或非法医疗机构的产品降糖产品要谨慎使用。从添加次数较多的盐酸苯乙双胍和格列苯脲可以看出，添加量分别从0.37~0.59 %和0.23~0.79 %，含量差别很大。含量低时根本达不到治疗目的；含量过高时毒副作用严重，危害病人健康。

（参考文献、图、表略）