优秀论文

PSA分散固相萃取液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜

和水果中的13种氨基甲酸酯

于彦彬¹ 谭培功 ² 曲璐璐¹ 王学松¹

（¹农业部农产品质量安全监督检验测试中心；²青岛市环境监测中心站）

1 实验部分

1.1仪器与试剂（略）

1.2 仪器条件

流动相为甲醇-水-乙腈，流速1.40mL/min，柱温30°C，激发波长339nm，发射波长445nm。

1.3 实验方法

1.3.1  样品的提取

 准确称取25.00 g样品放入100mL高型烧杯中，加入50.0mL乙腈，于分散机上匀浆2 min后过滤，滤液全部收集到装有5 g~7 g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡1 min，在室温下静置20 min，待乙腈相和水相分层。

1.3.2  样品的净化

 称取PSA 0.20g置于5mL比色管中，加入3.0mL样品提取液(乙腈相)，盖上塞子，在快速混匀器上混匀1min，静置5min，取上清液以0.45mm的有机相滤膜过滤于样品瓶中，分取1.0mL于5mL比色管中，以氮气流吹干，加入1mL含10%乙腈的超纯水（pH=3.0），在快速混匀器上混匀后，待分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的建立

选用Carbamate Analysis HPLC Column 3.9 mm i.d´15cm色谱柱，对流动相甲醇-水-乙腈的比例进行优化，确定流动相组成见表1，流速为1.40mL/min时， 13种组分除了涕灭威砜和杀线威、残杀威和克百威及仲丁威和灭虫威三对物质未完全达到基线分离外，其它7种组分均达到基线分离。

2.2样品介质及进样量的影响

    实验表明，过量的甲醇和乙腈对氨基甲酸酯衍生物的荧光具有猝灭作用，并导致色谱峰的不对称性增加，当用10%乙腈的pH=3.0的超纯水溶解样品，进样100mL，色谱峰形对称且灵敏度比用含12%甲醇的水溶解样品的灵敏度高。因此实验时选择含有10%乙腈（pH=3.0）的超纯水溶解样品。

2.3 衍生温度的影响

衍生反应温度对衍生反应速度有着重要的影响。实验结果表明，衍生反应温度由60℃升至80℃时，10种氨基甲酸酯的峰面积随温度的升高而快速增加。温度在80℃~110℃之间，峰面积最高，且基本恒定，故衍生反应温度选择100℃。

2.4氢氧化钠流速的选择

氨基甲酸酯的衍生反应分二步进行，氨基甲酸酯先在碱性溶液中水解产生甲胺，然后甲胺和邻苯二甲醛及巯基乙醇反应生成具有强荧光性的异吲哚衍生物。反应中，氢氧化钠的加入量对衍生反应起着关键性的作用。大部分氨基甲酸酯随着加入氢氧化钠速度的增大，荧光响应值增加，在流速0.4mL/min时，反应最佳，所以选择氢氧化钠流速为0.4mL/min。

2.5邻苯二甲醛和巯基乙醇加入量的选择

衍生试剂邻苯二甲醛和巯基乙醇加入量及二者之间的比例对衍生反应的程度有很大影响，10种氨基甲酸酯随着衍生试剂邻苯二甲醛和巯基乙醇流速的增大，荧光响应值增加，邻苯二甲醛的流速在0.40～0.70mL/min范围内，大部分氨基甲酸酯的荧光响应值最大。改变巯基乙醇和邻苯二甲醛的比例从2.5:100～20:100时，荧光响应值先逐渐增大，然后逐渐减小，在10/100的比例上，响应值达到最大值，故选择巯基乙醇与邻苯二甲醛比例为10：100，衍生试剂的流速为0.60mL/min。

2.6  检测限、线性范围、线性方程及线性关系

在仪器最佳测定条件下，在所测定的浓度范围内，13种氨基甲酸酯的含量与峰面积之间的相关系数在0.9940～0.9998之间，保留时间的相对标准偏差在0.03%～0.22%之间，检测限在2.00～2.28µg/L范围内。在欧盟食品中农药残留限量标准中，西瓜、杏、胡萝卜等物质中涕灭威、残杀威限量标准为0.05mg/kg，克百威杏为0.1mg/kg、西瓜为0.2mg/kg，此方法能够满足分析要求。

2.7 PSA分散固相萃取方法与氨基柱固相萃取方法的比较

目前测定氨基甲酸酯最常用的净化方法是使用氨基柱净化，本文比较了氨基柱与PSA分散固相萃取的净化效率，PSA分散固相萃取方法按本方法进行；氨基柱固相萃取方法按照NY/T761-2008标准进行净化处理，净化液浓缩后以氮气流吹干，用含10%乙腈的超纯水(pH=3.0)定容至5.00mL，并用0.45mm的滤膜过滤，滤液用于液相色谱分析。13种农药残留用PSA分散固相萃取法后,平均回收率和相对标准偏差分别在77.6%~97.8%和0.55%~2.1%之间；氨基柱固相萃取法后，平均回收率和相对标准偏差分别在60.4%~86.0%和0.89%~11%之间。因此用PSA分散相净化效果优于氨基柱固相萃取法，并且操作简单。

2.8实际样品的测定结果

准确称取25.00g西瓜、杏、茄子、胡萝卜等样品各7份，其中2份用于测定样品中13种氨基甲酸酯的实际含量，另外5份加入一定量的13种氨基甲酸酯的标准溶液，放置30min；再另称取西瓜样品加入三种不同浓度的13种氨基甲酸酯的标准溶液，按照实验方法测定。四种介质中13种氨基甲酸酯的平均回收率在71.7%~110%之间，相对标准偏差在0.68%~15%之间。对于茄子、杏，无论用PSA净化还是用氨基柱净化，在3-羟基克百威峰附近均有很强的干扰峰存在，需要改变分离条件再测定。

3结论

以PSA分散固相萃取净化，液相色谱柱分离，建立了柱后衍生荧光法测定蔬菜和水果中13种氨基甲酸酯的分析方法。该方法简单、快速、基体干扰少，灵敏度高，重现性好。PSA分散固相萃取净化完全可以替代氨基柱固相萃取净化。

（参考文献、图、表略）